MYH13 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400602-ACT

MYH13 kodiert die Myosin-Schwerketten‑Isoform 13, ein schnelles Motorprotein der Skelettmuskulatur, das aktinabhängige Kontraktionen durch ATPase‑getriebenes Querbrücken‑Zyklieren innerhalb des Sarkomers ermöglicht. Als Bestandteil des myofibrillären kontraktilen Apparats trägt MYH13 zur Spezialisierung von Muskelfasern bei und reguliert die Kraftentwicklung sowie die Verkürzungsgeschwindigkeit in quergestreifter Muskulatur. Eine veränderte Expression oder Fehlregulation sarkomerischer Myosinprogramme ist für Studien zur Muskelentwicklung, zum Fasertypwechsel und zu Remodeling‑Signalwegen relevant, die die neuromuskuläre Physiologie beeinflussen. MYH13 ist daher ein nützlicher molekularer Ansatzpunkt zur Untersuchung transkriptioneller Netzwerke, die Struktur und Funktion der Skelettmuskulatur steuern, einschließlich myogener Differenzierung und kontraktilitätsassoziierter Genmodule.

MYH13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MYH13-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MYH13 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MYH13-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MYH13-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MYH13-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MYH13-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MYH13-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MYH13-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MYH13-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.