MYH10 Double Nickase Plasmid (m): sc-429543-NIC

Myh10 kodiert die nichtmuskeltypische Myosin‑Schwerketten‑IIB (MYH10), einen wichtigen aktinbasierten Motor, der die für Zytokinese, Zellmigration und die Aufrechterhaltung der Gewebearchitektur erforderlichen kontraktilen Kräfte erzeugt. Die von MYH10 getriebene Aktomyosin‑Dynamik reguliert Zelladhäsion und Polarität über den Umsatz fokaler Adhäsionen sowie eine RhoA/ROCK‑abhängige Umgestaltung des Zytoskeletts und koppelt mechanische Spannung an Signaloutputs, die die Morphogenese prägen. In Mausmodellen ist die MYH10‑Aktivität eng mit Entwicklungsprogrammen sowie der Organisation neuraler und kardiovaskulärer Gewebe verknüpft; zudem wurde eine Fehlregulation der nichtmuskeltypischen Myosin‑II‑Funktion mit Defekten der Zellteilung, veränderter Motilität und aberranten Interaktionen mit der extrazellulären Matrix in Verbindung gebracht, die für krankheitsrelevante Phänotypen bedeutsam sind. Diese Eigenschaften machen Myh10 zu einem geeigneten Knotenpunkt, um Mechanotransduktion, zytoskelettale Organisation und die kraftabhängige Regulation der Genexpression zu untersuchen.

MYH10 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Myh10-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Myh10 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Myh10-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Myh10-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.