Plasmide Double Nickase (m) MYH10: sc-429543-NIC

Myh10 code la chaîne lourde IIB de la myosine non musculaire (MYH10), un moteur majeur basé sur l’actine qui génère les forces contractiles nécessaires à la cytokinèse, à la migration cellulaire et au maintien de l’architecture tissulaire. Les dynamiques actomyosine pilotées par MYH10 régulent l’adhésion et la polarité cellulaires via le renouvellement des adhésions focales et le remodelage du cytosquelette dépendant de RhoA/ROCK, en couplant la tension mécanique à des sorties de signalisation qui façonnent la morphogenèse. Dans les systèmes murins, l’activité de MYH10 est étroitement liée aux programmes de développement ainsi qu’à l’organisation des tissus nerveux et cardiovasculaires, et la dérégulation de la myosine II non musculaire a été associée à des défauts de division cellulaire, à une motilité altérée et à des interactions anormales avec la matrice extracellulaire, pertinentes pour des phénotypes liés aux maladies. Ces propriétés font de Myh10 un nœud utile pour disséquer la mécanotransduction, l’organisation du cytosquelette et la régulation de l’expression génique dépendante des forces.

MYH10 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Myh10 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Myh10. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Myh10. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Myh10.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.