Plasmide CRISPR d'Activation (h) MYH10: sc-401835-ACT

MYH10 code la myosine IIB non musculaire, une protéine motrice dépendante de l’actine qui génère des forces contractiles et régule l’organisation du cytosquelette, l’adhésion cellulaire et la migration directionnelle. Par son rôle au sein des réseaux actomyosine, MYH10 soutient la cytokinèse, la morphogenèse tissulaire et la mécanotransduction, en s’interfaçant avec des voies qui contrôlent la signalisation des GTPases Rho, la dynamique des adhésions focales et la tension corticale. Une expression altérée de MYH10 ou un dysfonctionnement de la myosine II a été associé à une dérégulation de la motilité cellulaire et des processus de développement, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude du remodelage épithélial, du neurodéveloppement et des phénotypes cellulaires liés à la fibrose. En tant que composant central du cytosquelette, MYH10 est fréquemment étudié dans des modèles explorant les changements de forme cellulaire, la fonction barrière et la signalisation dépendante des forces.

MYH10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MYH10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MYH10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MYH10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MYH10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MYH10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MYH10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MYH10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MYH10 dans les cellules tumorales présentant une expression de MYH10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.