MYCBP CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404476-ACT

MYCBP（MYC結合タンパク質）は核内コファクターであり、c-MYCのN末端領域に結合して、細胞増殖、代謝、細胞周期進行を制御するMYC依存的な転写プログラムを調節します。MYCBPは、MYC/MAXによるRNAポリメラーゼII標的遺伝子の制御に影響を与えることで、リボソーム生合成、増殖、細胞ストレス応答を司る経路に寄与します。MYCBPの発現変動やMYC–MYCBPの制御バランスの破綻は、腫瘍化に関連する転写状態と結び付けられており、腫瘍生物学、転写依存性（transcriptional addiction）、制御ネットワークの再構築に関する研究において重要です。MYC活性に対するMYCBPの作用は状況依存的であることから、コファクターの利用可能性ががん遺伝子駆動の表現型をどのように調整するのかを検討するうえで有用です。

MYCBP CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYCBPの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYCBP CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYCBP 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYCBP転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYCBPの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYCBP遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYCBP依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYCBP発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYCBP経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。