MYBPC3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401409-ACT

MYBPC3は、心筋ミオシン結合タンパク質C（cardiac myosin-binding protein C）をコードしており、太いフィラメントに関連するサルコメアタンパク質として、アクチン‐ミオシンのクロスブリッジサイクルを調節し、横紋筋の収縮動態に寄与します。MYBPC3は、リン酸化依存的な制御やA帯／Cゾーン内での相互作用を通じて、カルシウムハンドリング、筋原線維の組み立て、そして心筋細胞機能を形作る機械的シグナル伝達経路に影響を与えます。MYBPC3の遺伝学的変化や発現の攪乱は、遺伝性心筋症、とりわけ肥大型心筋症と強く関連しており、サルコメア機能不全や不適応性リモデリングをモデル化する目的で用いられます。筋特異的な構造調節因子として、MYBPC3はiPSC由来心筋細胞で頻繁に研究され、サルコメア生物学とストレス応答およびエネルギー適応との関連を明らかにするために利用されています。

MYBPC3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MYBPC3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MYBPC3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MYBPC3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMYBPC3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MYBPC3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMYBPC3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMYBPC3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMYBPC3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMYBPC3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。