MREG CRISPR Activation Plasmid (h): sc-405725-ACT

Das humane MREG (Melanoregulin) kodiert ein kleines, membranassoziiertes Protein, das an der Biogenese von Melanosomen und am Transport von Pigmentgranula beteiligt ist und damit die Reifung und Verteilung lysosomenverwandter Organellen beeinflusst. MREG wirkt an intrazellulären Trafficking-Prozessen mit, die sich mit der endosomal-lysosomalen Dynamik und dem zytoskelettalen Transport überschneiden, und prägt so die Positionierung von Organellen sowie die Handhabung von Fracht. Über seine Rollen in der Pigmentierungsbiologie und der Organellenhomöostase ist eine veränderte MREG-Aktivität relevant für Studien zu Pigmentierungsphänotypen und umfassenderen Defekten in vesikulären Transportwegen. Diese Funktionen machen MREG zu einem nützlichen Knotenpunkt, um Mechanismen der Organellenreifung, der Frachtsortierung und zellulärer Reaktionen auf Störungen des Traffickings zu untersuchen.

MREG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen MREG-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

MREG Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des MREG-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der MREG-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen MREG-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native MREG-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von MREG-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des MREG-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem MREG-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.