MK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421609

Visão geral

Mdk codifica a midquina (MK), um fator de crescimento secretado, ligante de heparina, que regula a proliferação, a sobrevivência e a migração celulares, bem como o crescimento de neuritos durante o desenvolvimento e a remodelação tecidual. A MK sinaliza por meio de proteoglicanos de superfície celular e de complexos de receptores, modulando vias ligadas a MAPK/ERK, PI3K/AKT e redes de quimiocinas inflamatórias, influenciando a angiogênese e as interações com a matriz extracelular. Em modelos murinos, a expressão alterada de Mdk está associada ao recrutamento desregulado de células imunes e a respostas de reparo aberrantes, sendo relevante para estudos de inflamação, fibrose e sinalização estromal associada a tumores. A MK também contribui para o padrão de organização do sistema nervoso e para respostas a lesões, tornando-se um ponto útil para investigar processos neuroinflamatórios e regenerativos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO MK (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Mdk em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Mdk, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Mdk na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína MK.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Mdk para a investigação da sinalização de MK, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Mdk críticos para a função MK
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Mdk para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo MK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo MK Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Mdk. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo MK Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR MK (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Mdk para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Mdk definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.