MK CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421609

Übersicht

Mdk kodiert Midkine (MK), einen sezernierten, heparinbindenden Wachstumsfaktor, der während der Entwicklung und beim Gewebeumbau Zellproliferation, Überleben, Migration und Neuritenauswachsung reguliert. MK signalisiert über Zelloberflächen-Proteoglykane und Rezeptorkomplexe und moduliert dabei Signalwege, die mit MAPK/ERK, PI3K/AKT sowie inflammatorischen Chemokin-Netzwerken verknüpft sind; dadurch beeinflusst es Angiogenese und Interaktionen mit der extrazellulären Matrix. In Mausmodellen ist eine veränderte Mdk-Expression mit einer fehlregulierten Rekrutierung von Immunzellen und aberranten Reparaturantworten assoziiert, was es für Studien zu Entzündung, Fibrose und tumorassoziierter Stromasignalisierung relevant macht. MK trägt außerdem zur Musterbildung des Nervensystems und zu Reaktionen auf Verletzungen bei und ist damit ein nützlicher Knotenpunkt zur Untersuchung neuroinflammatorischer und regenerativer Prozesse.

Das MK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mdk-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mdk-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mdk nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MK-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mdk-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MK-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mdk-Exone abzielen, die für die MK-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mdk-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MK CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mdk-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MK HDR-Plasmid (m) und MK HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mdk-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mdk-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.