Plasmide CRISPR d'Activation (h) MGAT3: sc-415617-ACT

Le gène humain MOGAT3 (également appelé MGAT3) code une monoacylglycérol acyltransférase qui catalyse l’acylation du monoacylglycérol pour former du diacylglycérol, un intermédiaire clé de la biosynthèse des triglycérides. Cette activité enzymatique relie le remodelage des glycérolipides à des réseaux plus larges du métabolisme lipidique qui influencent la composition des membranes, la formation de gouttelettes lipidiques et le stockage énergétique cellulaire. En modulant les niveaux de diacylglycérol et les pools lipidiques en aval, MGAT3 peut interagir avec des processus de signalisation sensibles aux seconds messagers lipidiques et aux réponses au stress métabolique. Une régulation altérée du métabolisme des glycérolipides est associée à des phénotypes de maladies métaboliques et à des voies impliquées dans la dyslipidémie, faisant de MGAT3 une cible utile pour des études mécanistiques de la gestion des lipides dans les cellules humaines.

MGAT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de MOGAT3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

MGAT3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus MOGAT3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription MOGAT3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de MGAT3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus MOGAT3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de MGAT3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie MGAT3 dans les cellules tumorales présentant une expression de MOGAT3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.