Mfn2/Mitofusin 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400536-NIC

MFN2は、ミトコンドリア外膜に局在するGTPアーゼであるMitofusin 2（Mfn2）をコードしており、ミトコンドリアの融合やネットワーク再構築を担う中核的因子である。これにより、ミトコンドリアDNAの完全性、膜電位、酸化的リン酸化能の維持に寄与する。融合機能に加えて、Mfn2は小胞体‐ミトコンドリア接触部位（MAM）にも関与し、Ca²⁺移送、脂質交換、細胞代謝とアポトーシスを協調させるストレスシグナル伝達経路を制御する。さらに、MFN2の活性はマイトファジーや統合ストレス応答などのミトコンドリア品質管理プログラムとも交差し、オルガネラ動態を生体エネルギー適応と結び付けている。MFN2機能の破綻は神経変性や末梢神経障害に関与するとされ、ミトコンドリア形態やシグナル伝達の変化が細胞ストレスに伴う心代謝機能障害の文脈でも、しばしば研究対象となっている。

Mfn2/Mitofusin 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における MFN2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、MFN2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、MFN2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、MFN2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。