Plasmide CRISPR d'Activation (m) Mfn1/Mitofusin 1: sc-426545-ACT

Le gène murin *Mfn1* code la mitofusine 1, une GTPase apparentée aux dynamines localisée sur la membrane externe des mitochondries, qui assure l’accolement et la fusion mitochondriales afin de maintenir la connectivité du réseau et la capacité bioénergétique. MFN1 coopère avec MFN2 lors de la fusion de la membrane externe et s’articule fonctionnellement avec les programmes de fusion de la membrane interne et d’organisation des crêtes pour soutenir la phosphorylation oxydative, l’homéostasie du calcium et la stabilité de l’ADN mitochondrial. En façonnant la morphologie mitochondriale, MFN1 influence la mitophagie et les voies de signalisation de l’apoptose, reliant ainsi le contrôle qualité mitochondrial aux réponses cellulaires au stress. Un déséquilibre de la fusion et de la fission mitochondriales impliquant MFN1 est pertinent dans l’étude de la neurodégénérescence, du stress cardiométabolique et de phénotypes du développement, où la dynamique mitochondriale conditionne l’homéostasie tissulaire.

Mfn1/Mitofusin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Mfn1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Mfn1/Mitofusin 1 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Mfn1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Mfn1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Mfn1/Mitofusin 1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Mfn1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Mfn1/Mitofusin 1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Mfn1/Mitofusin 1 dans les cellules tumorales présentant une expression de Mfn1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.