METT10D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-408605

Visão geral

O METTL16 humano (METT10D) codifica uma metiltransferase de RNA dependente de S-adenosil-L-metionina que instala N6-metiladenosina (m6A) em substratos de RNA estruturados, conectando a modificação de RNA ao controle do metabolismo de RNA. A metilação mediada por METTL16 pode influenciar o splicing de pré‑mRNA, a estabilidade do RNA e a tradução por meio de efeitos na estrutura do RNA e na montagem de ribonucleoproteínas, e tem sido associada à regulação da homeostase celular de doadores de metil via processamento do transcrito MAT2A. Por meio dessas funções, o METTL16 participa de programas de expressão gênica que moldam o crescimento celular e a adaptação ao estresse, tornando-o relevante para estudos de regulação epitranscriptômica em contextos de desenvolvimento e doença. Alterações na atividade de METTL16 têm sido implicadas em desregulação do processamento de RNA e em fenótipos de sinalização proliferativa observados em múltiplos modelos de pesquisa em câncer e neurobiologia.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO METT10D (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene METTL16 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do METTL16, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do METTL16 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína METT10D.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de METTL16 para a investigação da sinalização de METT10D, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) METTL16 críticos para a função METT10D
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos METTL16 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo METT10D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo METT10D Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus METTL16. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo METT10D Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR METT10D (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia METTL16 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo METTL16 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.