MEK-5 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401688-NIC

MAP2K5 codifica a MEK-5, uma MAP quinase quinase de dupla especificidade que fosforila e ativa preferencialmente a ERK5 (MAPK7) para regular programas de transcrição ligados à proliferação, diferenciação, adaptação ao estresse e remodelamento do citoesqueleto. A sinalização MEK-5–ERK5 integra sinais provenientes de fatores de crescimento e de estímulos ambientais e influencia efetores a jusante, como reguladores transcricionais da família MEF2, moldando respostas de sobrevivência e motilidade celular. A desregulação do eixo MAP2K5/ERK5 tem sido associada a alterações na transdução de sinais em contextos que incluem reconfiguração de vias oncogênicas, biologia cardiovascular e sinalização inflamatória, tornando MAP2K5 um nó útil para dissecar a comunicação cruzada entre vias. Em modelos de células humanas, perturbar a atividade de MEK-5 dá suporte a estudos mecanísticos sobre a especificidade da rede de MAPKs e a sinalização compensatória entre cascatas paralelas de MAPK.

MEK-5 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus MAP2K5 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de MAP2K5. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função MAP2K5. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com MAP2K5 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.