Plasmide Double Nickase (m) MEK-1: sc-424031-NIC

Map2k1 code pour MEK‑1, une kinase à double spécificité qui phosphoryle et active ERK1/2, propageant ainsi les signaux issus de RAS et de RAF à travers la cascade canonique MAPK/ERK. Cette voie intègre les signaux des facteurs de croissance et des cytokines pour réguler la progression du cycle cellulaire, la différenciation, la survie et des programmes transcriptionnels via des effecteurs en aval tels qu’ELK1, c‑FOS et MYC. L’activité de MEK‑1 est modulée par des mécanismes d’échafaudage (scaffold) et de rétrocontrôle qui façonnent l’amplitude et la durée du signal, assurant un contrôle précis des processus de développement et d’homéostasie tissulaire dans des modèles murins. Une signalisation MAP2K1/MEK‑1 dérégulée est largement impliquée dans une prolifération anormale et la spécification de lignages, ce qui en fait un nœud central pour l’étude de la dynamique de la signalisation oncogénique, des mécanismes de résistance et des interactions entre voies (cross-talk).

MEK-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Map2k1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Map2k1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Map2k1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Map2k1.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.