Med22 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423222

Panoramica

Med22 codifica una subunità centrale del complesso Mediator, un co-regolatore trascrizionale conservato che collega fattori di trascrizione specifici per la sequenza all’RNA polimerasi II. Nelle cellule di topo, MED22 supporta l’assemblaggio e la funzione del modulo “head” del Mediator, influenzando la trascrizione dipendente dal promotore, le dinamiche di inizio e programmi più ampi di espressione genica legati allo sviluppo e alla differenziazione. Coordinando risposte trascrizionali dipendenti dai segnali, MED22 contribuisce a vie che regolano il controllo del ciclo cellulare, le risposte allo stress e la specificazione di linea cellulare. La deregolazione dei componenti del Mediator è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi trascrizionale e a fenotipi rilevanti per la malattia, rendendo Med22 un nodo utile per indagare la vulnerabilità delle reti trascrizionali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Med22 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Med22 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Med22 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Med22 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Med22.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Med22 per lo studio della segnalazione di Med22, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Med22 critici per la funzione di Med22
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Med22 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Med22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Med22 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Med22. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Med22 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Med22 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Med22 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Med22 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.