MeCP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401228-ACT

MECP2 は、メチル化 CpG 結合タンパク質 2（MeCP2）をコードしており、メチル化 DNA に結合するクロマチン関連の制御因子として、エピジェネティックな抑制と活性化を協調させることで転写プログラムを形成します。MeCP2 は、コリプレッサーやクロマチンリモデリング複合体との相互作用を介して、神経細胞の成熟、シナプス可塑性、ならびに活動依存的な遺伝子発現に影響を及ぼし、DNA メチル化ダイナミクスを RNA 処理やゲノム安定性と結び付けます。MECP2 の発現量（ドーシス）の異常は神経発達経路を乱し、興奮性―抑制性のバランスを変化させるため、分化したニューロンやグリアにおける転写制御の研究において非常に重要です。MeCP2 はエピジェネティックなシグナルと長距離クロマチン構造を統合することから、ヒト神経系における遺伝子制御ネットワークを解析するためのモデルとして広く用いられています。

MeCP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性MECP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

MeCP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における MECP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はMECP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性MeCP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のMECP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるMeCP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびMECP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるMeCP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。