Particules Lentivirales d'Activation (m) MDA5: sc-427977-LAC

Le gène murin *Ifih1* code la protéine 5 associée à la différenciation des mélanomes (MDA5), une hélicase ARN cytosolique de la famille DExD/H-box qui détecte les longs ARN double brin générés lors de la réplication virale. Après liaison à l’ARN, MDA5 transmet un signal via MAVS pour activer TBK1/IKKε, puis les programmes en aval dépendant d’IRF3/IRF7 et de NF-κB, induisant la production d’interférons de type I et de gènes stimulés par les interférons. Cette voie module l’immunité antivirale innée, interagit avec l’autophagie et des réponses associées à l’inflammasome, et influence la présentation de l’antigène ainsi que le niveau basal d’inflammation. Une signalisation MDA5 dérégulée a été impliquée dans des signatures d’interféron aberrantes et des pathologies immuno-médiées, faisant de *Ifih1* un nœud pertinent pour disséquer l’activation de l’immunité innée et des phénotypes liés à l’inflammation dans des modèles murins.

Les particules d'activation lentivirales MDA5 (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Ifih1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MDA5 (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Ifih1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MDA5. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Ifih1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.