Plásmido Doble Nickase (h) MCH-1R: sc-402512-NIC

El receptor 1 de la hormona concentradora de melanina (MCHR1) codifica MCH-1R, un GPCR de clase A que media la señalización del neuropéptido MCH en el sistema nervioso central y en tejidos periféricos. Tras la unión del ligando, MCH-1R se acopla principalmente a las vías Gi/o y Gq para modular los niveles de cAMP, el flujo intracelular de calcio y la señalización MAPK/ERK posterior, integrando señales neuroendocrinas con la excitabilidad celular y las respuestas transcripcionales. Este receptor participa en circuitos que controlan el balance energético, la conducta alimentaria, el estado de alerta y los procesos relacionados con la recompensa, lo que lo vincula a estudios mecanísticos de la desregulación metabólica y de fenotipos neuropsiquiátricos. Se ha investigado la alteración de la señalización de MCH-1R en el contexto de la biología asociada a la obesidad y de vías relacionadas con el estado de ánimo y la ansiedad, lo que convierte a MCHR1 en una diana relevante para el análisis de vías en modelos celulares neuronales y metabólicos.

MCH-1R El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MCHR1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MCHR1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MCHR1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MCHR1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.