MCART1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-417948

概要

SLC25A51 は、ミトコンドリア内膜のキャリアである MCART1 をコードしており、NAD をマトリックスへ輸送することでミトコンドリアのレドックス代謝の維持に関与すると考えられています。酸化的リン酸化、TCA 回路に連結した脱水素酵素反応、ならびにミトコンドリア・サーチュイン依存的なタンパク質の脱アシル化に必要な NAD の利用可能性に影響を与えることで、MCART1 はエネルギー恒常性とストレス応答に寄与します。ミトコンドリアにおける NAD の取り扱いの破綻は、代謝シグナル伝達や活性酸素種（ROS）のバランスを再構築し得ますが、これらは増殖性疾患や変性疾患の文脈でしばしば攪乱されるプロセスです。そのため、SLC25A51/MCART1 は、ヒト細胞モデルにおけるミトコンドリア機能、代謝リプログラミング、ならびに遺伝子型から表現型への関係性を研究するうえで注目されています。

MCART1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるSLC25A51遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、SLC25A51内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、SLC25A51のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、MCART1タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、MCART1シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、SLC25A51欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• MCART1の機能に不可欠なSLC25A51エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、SLC25A51ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• MCART1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMCART1 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、SLC25A51遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  MCART1 HDRプラスミド（h）および MCART1 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはSLC25A51ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のSLC25A51標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。