MBOAT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-426448

Übersicht

Mboat2 kodiert „membrane bound O-acyltransferase domain containing 2“ (MBOAT2), eine im ER und an Membranen lokalisierte Acyltransferase, die an der Umgestaltung von Phospholipiden durch Reacylierung von Lysophospholipiden beteiligt ist. Indem MBOAT2 den Einbau von Fettsäure-Acylresten in membranständige Glycerophospholipide beeinflusst, kann es die Membranzusammensetzung, die Homöostase von Organellen und lipidabhängige Signalprozesse im Zusammenhang mit zellulären Stressantworten verändern. Ein veränderter Phospholipidstoffwechsel ist generell relevant für metabolische Dysfunktionen, Entzündungen und die mit Krebs assoziierte Umgestaltung von Membranen, wodurch Mboat2 einen geeigneten Ausgangspunkt für mechanistische Studien lipidgetriebener Phänotypen darstellt. In Mausmodellen unterstützt eine genetische Perturbation von Mboat2 Analysen auf Signalweg-Ebene von Acyltransferase-Netzwerken und kompensatorischem Lipid-Remodeling.

Das MBOAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Mboat2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Mboat2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Mboat2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die MBOAT2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Mboat2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der MBOAT2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Mboat2-Exone abzielen, die für die MBOAT2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Mboat2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom MBOAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom MBOAT2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Mboat2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das MBOAT2 HDR-Plasmid (m) und MBOAT2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Mboat2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Mboat2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.