MBNL1 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-425296-LAC

Mbnl1 codifica o regulador de splicing do tipo muscleblind 1 (MBNL1), uma proteína de ligação a RNA que reconhece motivos YGCY para controlar o splicing alternativo, a localização do mRNA e a sua estabilidade durante o desenvolvimento e a manutenção dos tecidos. Em camundongos, a MBNL1 coordena transições entre isoformas de splicing que influenciam a organização do citoesqueleto, a excitabilidade da membrana e programas de diferenciação em tecidos musculares, cardíacos e neurais. A disfunção da família MBNL está associada a redes extensas de splicing incorreto implicadas na patobiologia da distrofia miotônica e de outros distúrbios do processamento de RNA, tornando Mbnl1 um nó central para o estudo da regulação gênica dependente de splicing. O processamento de RNA dependente de MBNL1 também se cruza com a remodelação do transcriptoma responsiva ao estresse e com mudanças de estado celular, que podem ser medidas por RNA-seq com resolução de isoformas e por ensaios funcionais.

As Partículas de Ativação Lentivirais MBNL1 (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Mbnl1 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais MBNL1 (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Mbnl1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de MBNL1. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Mbnl1 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.