MAVS Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400769-ACT

MAVS (proteína de sinalização antiviral mitocondrial) é um adaptador ancorado à mitocôndria que retransmite a detecção de vírus de RNA por RIG-I (DDX58) e MDA5 (IFIH1) para a sinalização imune inata a jusante. Após a ativação, MAVS nucleia agregados do tipo príon que recrutam adaptadores da família TRAF e ativam os complexos TBK1/IKK, impulsionando programas transcricionais mediados por IRF3/IRF7 e NF-κB. Essa via induz interferons do tipo I e citocinas inflamatórias que modulam a restrição antiviral, o imunometabolismo e respostas de morte celular programada. A sinalização desregulada de MAVS tem sido implicada em assinaturas aberrantes de interferon e inflamação crônica, sendo frequentemente estudada no contexto de mecanismos virais de evasão imune.

MAVS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MAVS sem alterar a sequência de ADN subjacente.

MAVS O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MAVS em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MAVS, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de MAVS. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MAVS nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de MAVS no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via MAVS em células tumorais com expressão de MAVS silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.