MARK3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406362

Descripción general

MARK3 (quinasa 3 reguladora de la afinidad por microtúbulos, *microtubule affinity-regulating kinase 3*) es una quinasa de serina/treonina de la familia PAR-1/MARK que fosforila proteínas asociadas a microtúbulos, incluida tau, para modular la dinámica de los microtúbulos y la polaridad celular. Actúa aguas abajo de señales reguladoras de la polaridad y se integra con vías que controlan la remodelación del citoesqueleto, el tráfico vesicular y la progresión del ciclo celular. A través de sus funciones en la morfogénesis neuronal y la especificación axón-dendrita, la actividad desregulada de MARK3 se ha relacionado con una fosforilación aberrante de tau y con procesos asociados a la neurodegeneración. MARK3 también se estudia en contextos de pérdida de polaridad epitelial y migración alterada, donde la inestabilidad de los microtúbulos contribuye a fenotipos celulares relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO MARK3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen MARK3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del MARK3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de MARK3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína MARK3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en MARK3 para la investigación de la señalización de MARK3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de MARK3 críticos para la función de MARK3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de MARK3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido MARK3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido MARK3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus MARK3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR MARK3 (h) y el plásmido HDR MARK3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología MARK3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana MARK3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.