MARK3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406362

Panoramica

MARK3 (microtubule affinity-regulating kinase 3) è una chinasi serina/treonina della famiglia PAR-1/MARK che fosforila proteine associate ai microtubuli, inclusa tau, per modulare la dinamica dei microtubuli e la polarità cellulare. Agisce a valle di segnali che regolano la polarità e interseca vie che controllano il rimodellamento del citoscheletro, il traffico vescicolare e la progressione del ciclo cellulare. Attraverso i suoi ruoli nella morfogenesi neuronale e nella specificazione assoni-dendriti, un’attività deregolata di MARK3 è stata collegata a un’anomala fosforilazione di tau e a processi associati alla neurodegenerazione. MARK3 è inoltre studiato in contesti di perdita della polarità epiteliale e di migrazione alterata, in cui l’instabilità dei microtubuli contribuisce a fenotipi cellulari rilevanti per la patologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MARK3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MARK3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MARK3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MARK3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MARK3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MARK3 per lo studio della segnalazione di MARK3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MARK3 critici per la funzione di MARK3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MARK3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MARK3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MARK3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MARK3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MARK3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MARK3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MARK3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MARK3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.