Plásmido Doble Nickase (h) MARCH9: sc-410240-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)MARCH9 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa MARCH9 (h) y el plásmido de doble nickasa MARCH9 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a MARCH9. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) MARCH9 | sc-410240-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) MARCH9 | sc-410240-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH9 codifica una ligasa E3 de ubiquitina RING-CH asociada a membrana que se localiza en compartimentos de endomembranas y regula el recambio de proteínas mediante clasificación y degradación dependientes de ubiquitina. Al catalizar la ubiquitinación de proteínas de membrana seleccionadas, MARCH9 contribuye al tráfico endocítico, al direccionamiento hacia lisosomas y a procesos de control de calidad que determinan la disponibilidad de receptores y la dinámica de la señalización intracelular. Estas actividades vinculan a MARCH9 con vías que gobiernan la regulación de proteínas de membrana relacionadas con la inmunidad y la homeostasis celular, donde una función alterada de la ligasa de ubiquitina puede influir en respuestas al estrés y en la remodelación del proteoma de la superficie celular. La desregulación de la ubiquitinación y el tráfico de proteínas de membrana es relevante para estudios mecanísticos de señalización inmunitaria, respuestas del huésped asociadas a infecciones y alteraciones más amplias de la proteostasis observadas en diversos contextos de enfermedad.
MARCH9 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus MARCH9 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de MARCH9. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de MARCH9. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con MARCH9 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.