Plasmide Double Nickase (h) MARCH5: sc-404655-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) MARCH5 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MARCH5 Double Nickase (h) et le plasmide MARCH5 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant MARCH5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) MARCH5 | sc-404655-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) MARCH5 | sc-404655-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MARCH5 (également appelé MITOL) est une ligase E3 ubiquitine de type RING localisée dans la membrane externe mitochondriale, qui régule le contrôle qualité des protéines mitochondriales et la dynamique de l’organite. En ubiquitinylant des substrats impliqués dans l’équilibre fusion–fission mitochondriale et dans la signalisation du stress, MARCH5 influence des processus tels que la mitophagie, l’apoptose et la réponse cellulaire intégrée au dysfonctionnement mitochondrial. Elle s’articule avec les voies ubiquitine–protéasome et les réseaux de maintien de l’homéostasie mitochondriale qui façonnent l’équilibre rédox et l’adaptation bioénergétique. Une activité ou une expression dérégulée de MARCH5 a été associée dans la littérature à des altérations de la morphologie mitochondriale et de la susceptibilité au stress, dans des contextes pertinents pour la neurodégénérescence et le métabolisme des cellules cancéreuses.
MARCH5 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus MARCH5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de MARCH5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de MARCH5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de MARCH5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.