Plasmide Double Nickase (m) MARCH1: sc-428465-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) MARCH1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide MARCH1 Double Nickase (m) et le plasmide MARCH1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant March1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) MARCH1 | sc-428465-NIC | 20 µg | $410.00 |
La protéine murine MARCH1 (membrane associated ring-CH-type finger 1) est codée par le gène March1 et correspond à une ligase E3 de l’ubiquitine, localisée aux compartiments endosomaux et à la membrane plasmique. Elle régule la signalisation immunitaire en contrôlant l’ubiquitination et le trafic de protéines clés exprimées à la surface cellulaire. MARCH1 favorise l’internalisation et la dégradation de molécules impliquées dans la présentation de l’antigène, telles que le CMH de classe II, ainsi que de la molécule co-stimulatrice CD86, modulant ainsi l’activation des cellules dendritiques et des lymphocytes B, la tolérance périphérique et les réponses inflammatoires. Par un tri dépendant de l’ubiquitine et un renouvellement lysosomal, MARCH1 relie l’homéostasie des protéines membranaires aux voies qui gouvernent l’endocytose, le transport vésiculaire et l’immunité adaptative. Une activité dérégulée de MARCH1 a été associée à des altérations de la présentation antigénique et de l’homéostasie immunitaire, ce qui soutient son étude dans des modèles d’auto-immunité, d’infection et d’interactions tumeur–système immunitaire.
MARCH1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus March1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de March1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de March1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de March1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.