Maltase-glucoamylase Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404265-ACT

O MGAM humano codifica a maltase-glucoamilase, uma α-glicosidase da borda em escova intestinal que hidrolisa resíduos terminais de glicose ligados por α-1,4 a partir de maltose, maltotriose e maltooligossacarídeos, liberando glicose livre. Essa enzima atua nas etapas finais da digestão do amido e do glicogênio da dieta, complementando funcionalmente a sacarase-isomaltase e modulando a disponibilidade pós-prandial de carboidratos na superfície mucosa. A expressão e a atividade de MGAM se cruzam com programas de diferenciação de enterócitos e redes de sensoriamento de nutrientes que influenciam o metabolismo epitelial. Reduções genéticas ou adquiridas na função de MGAM têm sido associadas a fenótipos de má absorção de carboidratos e são relevantes para estudos de disfunção intestinal e homeostase metabólica.

Maltase-glucoamylase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de MGAM sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Maltase-glucoamylase O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus MGAM em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição MGAM, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Maltase-glucoamylase. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus MGAM nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Maltase-glucoamylase no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Maltase-glucoamylase em células tumorais com expressão de MGAM silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.