Partículas Lentivirales de Activación (m) MAK: sc-421549-LAC

Mouse Mak codifica la cinasa asociada a células germinales masculinas (MAK), una cinasa de serina/treonina de la familia relacionada con MAPK que modula la señalización dependiente de fosforilación y procesos vinculados al ciclo celular. La actividad de MAK se ha relacionado con la regulación de la progresión mitótica y programas de diferenciación, y en tejidos especializados se ha implicado en la biología asociada a los cilios y a los fotorreceptores. La señalización cinasa desregulada que involucra a MAK se ha estudiado en contextos de proliferación celular anómala y homeostasis tisular, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos de redes de quinasas en modelos de desarrollo y enfermedad. Por tanto, MAK es un objetivo útil para investigar la comunicación cruzada entre el control del ciclo celular, la organización del citoesqueleto y la transducción de señales en sistemas murinos.

Las partículas de activación lentiviral MAK (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Mak en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MAK (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Mak, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MAK. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Mak y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.