MAGE-C1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403336-ACT

Il gene umano MAGEC1 codifica MAGE-C1, un antigene cancro/testicolo prevalentemente ristretto alle cellule germinali ma frequentemente ri-espresso nelle neoplasie, dove può modulare programmi delle cellule tumorali associati alla sopravvivenza e al riconoscimento immunitario. MAGE-C1 fa parte della famiglia MAGE di tipo I ed è stato collegato alla segnalazione dipendente dall’ubiquitina tramite interazioni con ligasi E3 dell’ubiquitina contenenti dominio RING, influenzando la stabilità proteica e le vie di risposta allo stress. Un’espressione deregolata di MAGEC1 è stata riportata in contesti di tumori ematologici e solidi ed è comunemente utilizzata come marcatore molecolare dell’espressione antigenica e degli stati trascrizionali nella biologia tumorale. Lo studio di MAGE-C1 supporta ricerche sulla presentazione dell’antigene, sulla regolazione della proteostasi e sui meccanismi di controllo trascrizionale rilevanti per i fenotipi oncogenici.

MAGE-C1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MAGEC1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MAGE-C1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MAGEC1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MAGEC1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MAGE-C1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MAGEC1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MAGE-C1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MAGE-C1 nelle cellule tumorali con espressione di MAGEC1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.