MafG Plasmide Double Nickase (h): sc-401959-NIC

MAFG codifica MafG, un fattore di trascrizione bZIP della famiglia dei piccoli Maf, privo di un dominio di transattivazione e funzionante principalmente come partner obbligato di dimerizzazione per fattori della famiglia CNC come NFE2L2/NRF2 e per le proteine BACH. Attraverso questi eterodimeri, MafG si lega agli elementi di riconoscimento Maf/agli elementi di risposta antiossidante (MARE/ARE) per regolare le risposte allo stress ossidativo, il metabolismo degli xenobiotici, l’omeostasi dell’eme e programmi trascrizionali più ampi legati al redox e all’infiammazione. L’attività di MafG è integrata con la segnalazione KEAP1–NRF2 e influenza l’adattamento cellulare allo stress elettrofilo e metabolico. Un’espressione deregolata di MAFG o un’alterazione dell’equilibrio tra piccoli Maf e fattori CNC è stata associata a modifiche delle reti geniche antiossidanti ed è stata osservata in diversi contesti rilevanti per la biologia del cancro, la neurodegenerazione e i meccanismi delle malattie infiammatorie croniche.

MafG Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MAFG nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MAFG. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MAFG. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MAFG interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.