Partículas Lentivirales de Activación (h) MAF1: sc-418170-LAC

MAF1 es un represor transcripcional conservado que acopla las señales de nutrientes y de estrés a la actividad de la ARN polimerasa III, modulando así la síntesis de ARNt y otros ARN pequeños no codificantes necesarios para la capacidad de traducción de proteínas. Su actividad se regula mediante fosforilación aguas abajo de PI3K–AKT–mTOR y vías relacionadas, lo que permite a las células ajustar la demanda biosintética durante el crecimiento, la inanición y las respuestas al estrés. A través del control de la transcripción de Pol III y de la homeostasis de la traducción, MAF1 influye en el crecimiento celular, la adaptación metabólica y los programas de proteostasis. La desregulación de la actividad de Pol III y de las redes de señalización de mTOR aguas arriba en las que participa MAF1 se estudia con frecuencia en contextos como el crecimiento oncogénico, la biología de las enfermedades metabólicas y fenotipos asociados al estrés.

Las partículas de activación lentiviral MAF1 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MAF1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral MAF1 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MAF1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de MAF1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MAF1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.