Particules Lentivirales d'Activation (h) MAF1: sc-418170-LAC

MAF1 est un répresseur transcriptionnel conservé qui couple les signaux liés aux nutriments et au stress à l’activité de l’ARN polymérase III, modulant ainsi la synthèse des ARNt et d’autres petits ARN non codants nécessaires à la capacité de traduction des protéines. Son activité est régulée par phosphorylation en aval des voies PI3K–AKT–mTOR et apparentées, ce qui permet aux cellules d’ajuster la demande biosynthétique au cours de la croissance, de la privation de nutriments et des réponses au stress. En contrôlant la transcription par Pol III et l’homéostasie de la traduction, MAF1 influence la croissance cellulaire, l’adaptation métabolique et les programmes de protéostase. La dérégulation de l’activité de Pol III et des réseaux de signalisation mTOR en amont auxquels MAF1 participe est fréquemment étudiée dans des contextes tels que la croissance oncogénique, la biologie des maladies métaboliques et des phénotypes associés au stress.

Les particules d'activation lentivirales MAF1 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de MAF1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales MAF1 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription MAF1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de MAF1. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif MAF1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.