Mad 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406722

概要

MXD3（Mad 3）は、MYC/MAX/MXD制御ネットワークにおいて、MAXとヘテロ二量体を形成し、E-box依存的な遺伝子発現を調節する塩基性ヘリックス・ループ・ヘリックス（bHLH）-ロイシンジッパー型転写因子です。一般に転写抑制や分化プログラムの強化に関与することが多い他のMXDファミリー分子とは対照的に、MXD3は特定の細胞文脈において増殖に関連した転写状態と結び付けられており、細胞周期の進行や系譜決定に影響を及ぼします。この経路を通じて、MXD3はクロマチンに関連した転写出力を形作るシグナルを統合し、増殖制御や発生・分化の制御に関わる経路へ影響し得ます。MXD3の発現変動は複数のがん関連トランスクリプトームデータセットで報告されており、ヒト細胞における腫瘍性転写回路や文脈依存的な増殖表現型を研究する上で、その重要性が支持されています。

Mad 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるMXD3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、MXD3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、MXD3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Mad 3タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Mad 3シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、MXD3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Mad 3の機能に不可欠なMXD3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、MXD3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Mad 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびMad 3 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、MXD3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Mad 3 HDRプラスミド（h）および Mad 3 HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMXD3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMXD3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。