Plasmide Double Nickase (m) Lyst: sc-421511-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Lyst correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Lyst Double Nickase (m) et le plasmide Lyst Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Lyst. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
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| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Lyst | sc-421511-NIC | 20 µg | $410.00 |
Chez la souris, Lyst (lysosomal trafficking regulator) code une grande protéine cytosolique essentielle à la biogenèse des organites liés aux lysosomes et à la dynamique fusion–fission des vésicules. Il coordonne le trafic endolysosomal, régule la taille et la distribution des lysosomes, et favorise la maturation correcte des phagosomes et des granules de sécrétion dans les cellules immunitaires et pigmentaires. Une altération de Lyst perturbe la fonction autophagie–lysosome et le traitement des antigènes, entraînant des défauts de dégranulation et de destruction intracellulaire. Le dysfonctionnement de LYST est associé à des phénotypes de type syndrome de Chediak–Higashi, faisant de Lyst un gène clé pour l’étude de la dysrégulation immunitaire, de la biologie de la pigmentation et des voies associées aux lysosomes.
Lyst Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Lyst dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Lyst. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Lyst. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Lyst.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.