LRP130 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402029-ACT

LRPPRC codifica a proteína contendo repetições pentatricopeptídicas ricas em leucina (LRP130), um fator ligante de RNA que se localiza predominantemente nas mitocôndrias e regula o processamento pós-transcricional, a estabilidade e a tradução de transcritos codificados pelo genoma mitocondrial. Ao coordenar a expressão de componentes da fosforilação oxidativa, a LRP130 sustenta a montagem da cadeia respiratória, o metabolismo energético mitocondrial e a adaptação celular ao estresse metabólico. A LRPPRC também se relaciona com o controle de qualidade da expressão gênica mitocondrial e pode influenciar vias de comunicação mitonuclear. A desregulação de LRPPRC tem sido associada a fenótipos de disfunção mitocondrial e à biologia de doenças neurometabólicas, tornando-a relevante para estudos de bioenergética e homeostase mitocondrial.

LRP130 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de LRPPRC sem alterar a sequência de ADN subjacente.

LRP130 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus LRPPRC em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição LRPPRC, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de LRP130. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus LRPPRC nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de LRP130 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via LRP130 em células tumorais com expressão de LRPPRC silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.