LIX1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406006-ACT

Humanes LIX1 (limb expression 1) kodiert ein konserviertes Protein, das an Entwicklungs- und Musterbildungsprogrammen sowie an der kontextabhängigen Steuerung der zellulären Differenzierung beteiligt ist. Obwohl sein molekularer Wirkmechanismus noch nicht vollständig geklärt ist, korreliert die LIX1-Expression mit mesenchymalen und vorläuferähnlichen Zuständen und wurde mit transkriptionellen Netzwerken in Verbindung gebracht, die die Linienfestlegung und die Gewebemorphogenese prägen. Dysregulierte LIX1-Spiegel wurden in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, darunter auch in Krebsarten, bei denen veränderte Differenzierung, Migration und Stromainteraktionen zum Fortschreiten beitragen. Daher wird LIX1 häufig als regulatorischer Knotenpunkt untersucht, der Entwicklungs-Genexpressionsprogramme mit der Plastizität von Zellzuständen verknüpft.

LIX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen LIX1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LIX1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des LIX1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der LIX1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LIX1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native LIX1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LIX1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LIX1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem LIX1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.