Plásmido CRISPR de Activación (h) LIN-28: sc-401164-ACT

LIN28A humano codifica LIN-28, una proteína de unión a ARN evolutivamente conservada que regula la expresión génica postranscripcional al modular la estabilidad y la traducción del ARNm, y al bloquear selectivamente la maduración de los microARN de la familia let-7. A través del eje LIN28/let-7, LIN-28 influye en el calendario del desarrollo, el mantenimiento de estados similares a células madre y la reprogramación metabólica, con efectos posteriores sobre programas de crecimiento y diferenciación. La actividad de LIN28A se entrecruza con las vías de biogénesis de miARN y con redes de señalización que determinan decisiones de destino celular, incluidas situaciones vinculadas a la proliferación y la pluripotencia. La desregulación del control LIN28A/let-7 se ha asociado con la biología tumoral y con estados de diferenciación alterados, lo que la convierte en una diana útil para estudios mecanísticos de redes oncogénicas y de regulación génica del desarrollo.

LIN-28 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LIN28A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LIN-28 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LIN28A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LIN28A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LIN-28. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LIN28A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LIN-28 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LIN-28 en células tumorales con expresión de LIN28A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.