Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Plásmido Doble Nickase (h) LIMP II: sc-402532-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)LIMP II consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa LIMP II (h) y el plásmido de doble nickasa LIMP II (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SCARB2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: LIMP II Anticuerpo (D-3): sc-55570
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) LIMP II | sc-402532-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) LIMP II | sc-402532-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SCARB2 codifica la proteína integral de membrana lisosomal 2 (LIMP II), una glucoproteína de membrana de tipo III que favorece el tráfico endolisosomal y la biogénesis de los lisosomas. LIMP II actúa como receptor de clasificación para la glucocerebrosidasa y contribuye al catabolismo de lípidos, a la estabilidad de la membrana lisosomal y al recambio asociado a la autofagia. SCARB2 también está implicado en vías de internalización mediadas por receptores y puede influir en procesos de entrada viral a través del direccionamiento endosomal. La desregulación de SCARB2/LIMP II se ha vinculado a fenotipos relacionados con enfermedades de almacenamiento lisosomal y neurodegeneración, lo que la hace relevante para estudios de proteostasis dependiente de lisosomas y de respuestas al estrés metabólico.
LIMP II El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SCARB2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SCARB2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SCARB2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SCARB2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.