Plásmido Doble Nickase (h) LIMK-2: sc-401296-NIC

El gen humano **LIMK2** codifica la quinasa del dominio LIM 2 (LIMK-2), una quinasa de serina/treonina que fosforila e inactiva a cofilina para regular el recambio de los filamentos de actina. A través de la señalización de GTPasas de la familia Rho mediante ROCK y PAK, LIMK-2 coordina la dinámica del citoesqueleto subyacente al control de la forma celular, la adhesión, la migración y la citocinesis. La actividad de LIMK2 contribuye a vías relacionadas con la transición epitelio-mesénquima, la mecanotransducción y la estructura sináptica, y la desregulación del remodelado de actina se asocia con comportamiento invasivo y fenotipos anómalos de remodelado tisular. Las alteraciones en la señalización de LIMK2 se han estudiado en contextos como la motilidad celular en cáncer y programas vinculados a la metástasis, procesos neurodegenerativos que implican la dinámica de las espinas dendríticas y el remodelado fibrótico, donde la contractilidad actina–miosina se ve perturbada.

LIMK-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus LIMK2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de LIMK2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de LIMK2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con LIMK2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.