LHX3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-404482

Panoramica

LHX3 (LIM homeobox 3) codifica un fattore di trascrizione homeodominio con dominio LIM che coordina i programmi di specificazione di linea e di differenziamento terminale durante l’embriogenesi. Nell’ipofisi e nel sistema nervoso, LHX3 regola reti trascrizionali che controllano il destino delle cellule produttrici di ormoni e lo sviluppo dei motoneuroni attraverso il legame al DNA in modo sequenza-specifico e il reclutamento di cofattori. L’alterazione della regolazione genica dipendente da LHX3 perturba i percorsi di sviluppo che governano l’organogenesi dell’ipofisi anteriore e la connettività neuronale. Evidenze genetiche nell’uomo collegano una funzione alterata di LHX3 a una carenza combinata di ormoni ipofisari con fenotipi neuroevolutivi variabili, rendendolo un nodo utile per lo studio del controllo trascrizionale dello sviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX3 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LHX3 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LHX3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LHX3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LHX3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LHX3 per lo studio della segnalazione di LHX3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LHX3 critici per la funzione di LHX3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LHX3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LHX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LHX3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LHX3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LHX3 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LHX3 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LHX3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LHX3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.