LHX2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401071

Panoramica

LHX2 (LIM homeobox 2) codifica un fattore di trascrizione con dominio LIM che durante lo sviluppo regola la specificazione di linea e la patterning dei tessuti, con ruoli di rilievo nel mantenimento dei progenitori neurali, nell’arealizzazione corticale e nella morfogenesi del follicolo pilifero. Legandosi a cofattori LIM ed elementi del DNA a sequenza specifica, LHX2 coordina programmi trascrizionali connessi alle decisioni di destino cellulare, alla tempistica della differenziazione e a reti di segnalazione responsiva ai morfogeni, come il patterning dipendente da WNT e SHH. Un’attività disregolata di LHX2 è stata associata a traiettorie di neurosviluppo alterate e a stati trascrizionali aberranti osservati in molteplici contesti oncologici. In quanto regolatore nucleare, LHX2 rappresenta un nodo utile per analizzare i circuiti di regolazione genica che collegano programmi di sviluppo a fenotipi di proliferazione e differenziazione nelle cellule umane.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO LHX2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene LHX2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del LHX2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto LHX2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina LHX2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di LHX2 per lo studio della segnalazione di LHX2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni LHX2 critici per la funzione di LHX2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di LHX2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal LHX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal LHX2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus LHX2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal LHX2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR LHX2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia LHX2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio LHX2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.