Plásmido CRISPR de Activación (h) leupaxin: sc-405101-ACT

LPXN codifica leupaxina, una proteína adaptadora de la familia de paxilina enriquecida en las adhesiones focales, donde coordina la señalización dependiente de integrinas con la remodelación del citoesqueleto de actina. Mediante interacciones con quinasas y proteínas andamiaje, la leupaxina contribuye a la adhesión celular, la migración y los procesos de mecanotransducción que determinan la detección de la matriz extracelular y los programas transcripcionales posteriores. La actividad de LPXN converge con vías relacionadas con las adhesiones focales y con las GTPasas Rho que regulan la motilidad celular y el comportamiento invasivo. Se ha informado de una expresión o señalización desregulada de la leupaxina en múltiples contextos tumorales y en estados funcionales de células inmunitarias, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico en estudios de fenotipos asociados a la metástasis y a la señalización impulsada por la adhesión.

leupaxin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LPXN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

leupaxin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LPXN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LPXN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de leupaxin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LPXN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de leupaxin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía leupaxin en células tumorales con expresión de LPXN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.