LCRG1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-410137-ACT

GGNBP2 kodiert für LCRG1, ein nukleäres Protein, das an der transkriptionellen Regulation sowie an der Steuerung zellulärer Programme für Proliferation und Differenzierung beteiligt ist. Berichtete Funktionen bringen GGNBP2 mit chromatinassoziierten Prozessen und der Modulation von Genexpressionsnetzwerken in Verbindung, die den Zellzyklus und die Gewebehomöostase beeinflussen. Eine veränderte Expression von GGNBP2/LCRG1 wurde in Studien zur Tumorbiologie und zellulären Transformation beobachtet, was seine Rolle als kontextabhängiger Regulator in krebsrelevanten Signalwegen stützt. Als humanes Zielprotein bietet LCRG1 einen nützlichen Ansatzpunkt, um die übergeordnete transkriptionelle Kontrolle, nachgeschaltete Genexpressionssignaturen sowie Phänotypen in Zusammenhang mit Wachstum, Migration und Stressantworten zu untersuchen.

LCRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GGNBP2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

LCRG1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GGNBP2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GGNBP2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen LCRG1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GGNBP2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von LCRG1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des LCRG1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GGNBP2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.