Plasmide CRISPR d'Activation (m) Latrophilin-2: sc-430273-ACT

Adgrl2 code la latrophiline‑2, un récepteur couplé aux protéines G d’adhérence (aGPCR) qui contribue à la communication cellule‑cellule en reliant des signaux d’adhérence extracellulaires à une signalisation intracellulaire. La latrophiline‑2 participe à des processus liés à la connectivité neuronale, à l’organisation des synapses et à la mise en place des patrons de développement, via une signalisation associée aux GPCR et un remodelage du cytosquelette. En se liant à des ligands extracellulaires et à des modules d’adhérence, elle peut influencer des voies qui régulent la migration cellulaire, la polarité et l’architecture tissulaire. Les altérations de la signalisation des aGPCR et des programmes d’adhérence sont fréquemment étudiées dans le cadre de phénotypes neurodéveloppementaux et d’interactions cellulaires dérégulées, pertinentes pour la fonction des circuits associée aux maladies.

Latrophilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Adgrl2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

Latrophilin-2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Adgrl2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Adgrl2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de Latrophilin-2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Adgrl2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de Latrophilin-2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie Latrophilin-2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Adgrl2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.