LARGE2 Lentiviral Activation Particles (h): sc-414150-LAC

Das humane Gen **LARGE2** kodiert eine im Golgi-Apparat lokalisierte Glykosyltransferase, die zur posttranslationalen Glykosylierung extrazellulärer und membranständiger Proteine beiträgt, darunter auch zu Signalwegen, die die Ausgestaltung von Matriglykan auf **α‑Dystroglykan** steuern. Durch die Modulation der Glykanstruktur beeinflusst LARGE2 die Zell‑Matrix‑Adhäsion, die Organisation von Rezeptoren sowie Signalereignisse, die mit Interaktionen an der Basalmembran und der Gewebeintegrität verknüpft sind. Eine veränderte LARGE2‑Aktivität kann die Funktion von Glykoproteinen und die Kommunikation mit der extrazellulären Matrix stören, was sie für Studien zu Defekten der Dystroglykan‑Glykosylierung und zu breiteren, mit Glykosylierung assoziierten Phänotypen relevant macht. Die Expression von LARGE2 wird daher häufig in Modellen untersucht, die Golgi‑Glykosylierungsprogramme mit der neuromuskulären und der Entwicklungsbiologie verbinden.

LARGE2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente LARGE2-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

LARGE2 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der LARGE2-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen LARGE2-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen LARGE2-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.