Plásmido CRISPR de Activación (h) LARGE2: sc-414150-ACT

El gen humano **LARGE2** codifica una glicosiltransferasa bifuncional que contribuye a la glicosilación postraduccional de la **α-distroglucana**, favoreciendo la formación de **matriglicano** funcionalmente glicosilado, necesario para la unión a la matriz extracelular. A través de su papel en la red de glicosilación de la distroglicana, LARGE2 ayuda a regular la adhesión célula–matriz, la estabilidad de la membrana y la arquitectura tisular, especialmente en contextos de músculo y sistema nervioso. Las alteraciones en la glicosilación de la α-distroglucana son un componente central de las distroglicanopatías y de mecanismos relacionados con enfermedades neuromusculares, y los cambios en la glicosilación pueden modular la migración celular y la señalización en modelos relevantes para la enfermedad. Por ello, LARGE2 se estudia con frecuencia en vías que gobiernan la maduración de glicoproteínas, las interacciones con la membrana basal y la proteostasis dentro de la vía secretora.

LARGE2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LARGE2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

LARGE2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LARGE2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LARGE2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de LARGE2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LARGE2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de LARGE2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía LARGE2 en células tumorales con expresión de LARGE2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.