KIR6.2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-421232-ACT

O gene murino Kcnj11 codifica a KIR6.2, a subunidade formadora do poro de um canal de potássio retificador para dentro, que se associa à SUR1/ABCC8 para formar canais KATP sensíveis ao ATP. Ao acoplar as razões intracelulares de ATP/ADP ao potencial de membrana, a KIR6.2 regula a excitabilidade e o acoplamento estímulo-secreção, particularmente em células β pancreáticas, e também contribui para a detecção metabólica em neurônios, miócitos cardíacos e músculo esquelético. A abertura/fechamento dos canais KATP influencia o influxo de cálcio, a função mitocondrial e a sinalização a jusante que coordena a liberação de insulina e as respostas celulares ao estresse energético. A desregulação da atividade de Kcnj11/KIR6.2 é amplamente relevante para estudos de homeostase da glicose, disfunção de células β e canalopatias que afetam a sinalização elétrica e o metabolismo.

KIR6.2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Kcnj11 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

KIR6.2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Kcnj11 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Kcnj11, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de KIR6.2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Kcnj11 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de KIR6.2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via KIR6.2 em células tumorais com expressão de Kcnj11 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.