Plásmido CRISPR de Activación (h) KIR6.1: sc-401477-ACT

KCNJ8 codifica la subunidad del canal de potasio rectificador entrante KIR6.1, un componente central de los canales de potasio sensibles a ATP (KATP) que acoplan el estado metabólico celular con la excitabilidad de la membrana. En complejo con las subunidades del receptor de sulfonilurea (ABCC8/ABCC9), KIR6.1 regula el eflujo de potasio en respuesta a las proporciones intracelulares de ATP/ADP, modulando el potencial de membrana, la entrada de calcio y la señalización posterior que controla el tono vascular y la contractilidad del músculo liso. Estos canales son fundamentales para la detección metabólica y las vías de respuesta al estrés en tejidos excitables y no excitables, e influyen en la función mitocondrial y la bioenergética celular. La actividad alterada de KCNJ8/KIR6.1 se ha asociado con fenotipos cardiovasculares y relacionados con la excitabilidad, lo que respalda su relevancia en estudios de canalopatías y de mecanismos de enfermedad cardiometabólica.

KIR6.1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNJ8 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

KIR6.1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNJ8 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNJ8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de KIR6.1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNJ8 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de KIR6.1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía KIR6.1 en células tumorales con expresión de KCNJ8 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.