Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
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KIBRA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402677
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- KIBRA Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico KIBRA, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: KIBRA Antibody (B-3): sc-518263
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
KIBRA Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-402677 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
WWC1 codifica KIBRA, una proteina scaffold contenente domini WW, arricchita in cervello e rene, che coordina le interazioni proteina–proteina tramite i suoi domini WW e C2. KIBRA partecipa alla regolazione della via di segnalazione Hippo attraverso interazioni con le chinasi LATS e componenti correlati, collegando la polarità cellulare, l’inibizione da contatto e il controllo trascrizionale della proliferazione e dell’apoptosi. Interagisce inoltre con le vie del traffico di membrana e del rimodellamento del citoscheletro, supportando processi quali l’endocitosi e la migrazione direzionale. Una segnalazione WWC1/KIBRA deregolata è stata associata ad alterazioni della plasticità sinaptica ed è stata studiata nel contesto del controllo della crescita rilevante per il cancro e della neurobiologia.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO KIBRA (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene WWC1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del WWC1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto WWC1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina KIBRA.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di WWC1 per lo studio della segnalazione di KIBRA, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni WWC1 critici per la funzione di KIBRA
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di WWC1 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal KIBRA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal KIBRA CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus WWC1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal KIBRA Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR KIBRA (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia WWC1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio WWC1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.