Ki67 CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421656

概要

Mki67 は増殖マーカータンパク質 Ki67 をコードしており、Ki67 は細胞周期の進行と密接に関連する核内因子です。Ki67 は活発に細胞周期を回っている細胞で広く発現する一方、静止期では発現しません。Ki67 はクロマチンおよび有糸分裂期の染色体周辺部に局在して染色体の組織化を支え、適切な有糸分裂の進行に寄与するとともに、間期における核小体構造にも関与します。その発現は DNA 複製、有糸分裂、チェックポイント制御などを司る経路を含む細胞周期の中核的制御プログラムと統合されており、組織や培養細胞における増殖状態の定量に広く用いられています。Ki67 の発現量の異常は過増殖表現型としばしば相関し、マウスモデルにおける腫瘍生物学、組織再生、免疫細胞増殖の研究で活用されています。

Ki67 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるMki67遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Mki67内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Mki67のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ki67タンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ki67シグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Mki67欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ki67の機能に不可欠なMki67エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Mki67ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ki67 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKi67 CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Mki67遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ki67 HDRプラスミド（m）および Ki67 HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはMki67ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のMki67標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。