Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
Ketohexokinase Double Nickase Plasmid (h): sc-403399-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Ketohexokinase Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Ketohexokinase Double-Nickase-Plasmid (h) und Ketohexokinase Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf KHK abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Ketohexokinase: sc-377411
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Ketohexokinase Double Nickase Plasmid (h) | sc-403399-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Ketohexokinase Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403399-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **KHK** kodiert die Ketohexokinase (Fructokinase), ein ATP-abhängiges Enzym, das die Phosphorylierung von Fructose zu Fructose-1-phosphat katalysiert und damit den hepatischen Fructosestoffwechsel einleitet. Diese Reaktion speist den nachgeschalteten, durch Aldolase B vermittelten Kohlenstofffluss in Glykolyse, Glukoneogenese und Lipogenese ein und verknüpft so die Verarbeitung von Nahrungsfructose mit der zellulären Energiebilanz und der Metabolit-Signalgebung. Die KHK-Aktivität beeinflusst über ATP-Verbrauch und Phosphatbindung den Nukleotidumsatz sowie die Harnsäureproduktion und ist daher für Studien zu metabolischen Stressantworten relevant. Eine veränderte KHK-Expression oder -Funktion wurde mit angeborenen Störungen des Fructosestoffwechsels und breiteren Phänotypen metabolischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, was ihre Nutzung als Ansatzpunkt für mechanistische Untersuchungen in Hepatozyten- und Nierenmodellen unterstützt.
Ketohexokinase Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des KHK-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von KHK abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die KHK-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit KHK-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.