Ketohexokinase Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421261

Panoramica

Khk codifica la chetoesochinasi (fruttochinasi), un enzima chiave che catalizza la fosforilazione del fruttosio a fruttosio-1-fosfato, indirizzando il fruttosio verso i flussi di carbonio a valle. Nei tessuti murini con elevata capacità di gestire il fruttosio, questa attività si interfaccia con la glicolisi, la gluconeogenesi e, più in generale, con il metabolismo dei carboidrati e dell’energia attraverso la regolazione degli intermedi del trioso fosfato e della segnalazione metabolica epatica. Alterazioni del metabolismo del fruttosio dipendente da KHK sono state associate a fenotipi di stress metabolico, tra cui accumulo lipidico deregolato e alterazioni della segnalazione insulinica, rendendo Khk un nodo utile per studiare il sensing dei nutrienti e il rimodellamento metabolico. Nell’ambito delle vie responsivi al fruttosio, la perturbazione della chetoesochinasi può influenzare l’equilibrio redox, l’utilizzo di ATP e i programmi trascrizionali che governano l’omeostasi di lipidi e glucosio.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ketohexokinase (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Khk in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Khk insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Khk a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ketohexokinase.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Khk per lo studio della segnalazione di Ketohexokinase, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Khk critici per la funzione di Ketohexokinase
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Khk per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Khk. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ketohexokinase Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ketohexokinase (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Khk per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Khk definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.