Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-421261

概要

Khk はケトヘキソキナーゼ（フルクトキナーゼ）をコードしており、フルクトースをフルクトース-1-リン酸へとリン酸化する反応を触媒する主要酵素である。この反応により、フルクトースは下流の炭素フラックスへと組み込まれる。フルクトース処理能力の高いマウス組織では、この活性はトリオースリン酸中間体の調節や肝臓の代謝シグナル伝達を介して、解糖系、糖新生、ならびにより広範な糖質・エネルギー代謝と連携している。KHK 依存的なフルクトース代謝の変化は、脂質蓄積やインスリンシグナルの異常などを含む代謝ストレス表現型と関連づけられており、Khk は栄養感知と代謝リモデリングの研究に有用な結節点となる。フルクトース応答性経路の一部として、ケトヘキソキナーゼの撹乱は、レドックスバランス、ATP の利用、脂質およびグルコース恒常性を制御する転写プログラムに影響を及ぼしうる。

Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるKhk遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Khk内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Khkのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Ketohexokinaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Ketohexokinaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Khk欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Ketohexokinaseの機能に不可欠なKhkエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Khkゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Ketohexokinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびKetohexokinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Khk遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Ketohexokinase HDRプラスミド（m）および Ketohexokinase HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはKhkホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のKhk標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。